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如何用输尿管腰大肌隧道包埋法建立输尿管梗阻动物模型

     UlmMiller1962年首先报道该模型的制作。该技术建立输尿管部分梗阻动物模型的机理是:(1)腰大肌对输尿管的轻微压迫作用,使输尿管上段管腔变小,尿液引流受抑。(2)输尿管进、出腰大肌隧道时形成的两个角度使其蠕动受到抑制。(3)动物活动时腰大肌收缩产生的张力对输尿管的挤压作用。这样既可导致输尿管梗阻,引起肾积水,又能保持部分畅通,梗阻解除后,肾形态逐渐趋向恢复。输尿管腰大肌隧道包埋法在建立先天性UPJ狭窄的动物模型方面应用较多,在研究梗阻解除后肾功能的恢复情况中有比较优势。目前已成为使用较多的PUUO动物模型。该模型在体型大或小的动物均有报道,据以往报道,大动物研究较多,该模型最初是利用犬进行实验,将犬的一侧输尿管游离出一段,在输尿管相对应腰大肌上顺纹分离出相应长度的沟状裂隙,然后将游离的输尿管置入裂隙底部,丝线间断缝合关闭裂隙,造模4周后行尿路造影,梗阻侧肾积水形成,并通过二次手术证实梗阻以上输尿管及肾盂积水形成,之后手术解除梗阻,恢复输尿管解剖位置,梗阻解除后4-6周再次作尿路造影显示患肾积水消失,该实验第一次成功地复制了输尿管部分梗阻动物模型,但是由于该模型未明确输尿管梗阻程度的量化,该方法在大型动物身上操作较为方便,动物能够耐受手术,但从实验经济学角度上讲尚不能全面得到推广。

国内外许多学者进行了多方面的改进,Wen等将兔输尿管上段1/42/3分别埋入腰大肌,通过测定肾盂压力、压力-流率关系并记录输尿管蠕动波,证实建立输尿管轻度和重度部分梗阻,从而使梗阻程度得以量化。Hiep-Thieu Nguyen[20]利用右侧腰大肌隧道包埋法建立新生鼠输尿管部分梗阻动物模型,分别应用低浓度盐水、生理盐水、高浓度盐水及高糖饮食喂养,2月后测定梗阻肾小球滤过率、肾盂内压力及肾血流量,发现高盐和高糖组大鼠液体摄入量和尿量是低盐饮食组和正常饮食组的8-10倍,尽管输尿管部分梗阻,但是只有高尿量才会导致肾脏积水,尿量正常时GRF尚维持在正常水平,当尿量增加时患侧肾GRFGRF总均显著降低,肾盂压力升高,而肾血流量并未明显降低,表明减少液体及高盐摄入也许会减轻肾积水,延缓肾功能的进一步损害。林国安等采用Wistar大白鼠以腰大肌压迫法造成左侧输尿管部分梗阻,术后随机于梗阻后124周和6周分别观察动物肾盂腔面积和肾实质面积,肾实质相对面积、肾小球血管网平均面积,球旁远曲小管平均内径和远曲小管壁平均厚度,梗阻侧输尿管直径和肾盂腔面积均较健侧显著扩张,肾实质面积和肾实质相对面积较健侧明显减少。梗阻侧肾小球血管网平均面积、肾小管壁平均厚度均显著小于健侧,肾小管腔平均内径则明显大于健侧,随着梗阻时间的延长,梗阻侧肾小管平均厚度持续减少。

          

但该实验仅从病理改变上描述输尿管部分梗阻,并未明确输尿管梗阻程度与肾功能损害的相关性。国内杨关天等用改良的输尿管腰大肌管包理法建立右侧输尿管部分梗阻的动物模型,该模型具体方法是入腹后显露右侧输尿管上段,将输尿管自肾下极水平至骼腰血管一段游离出,长度为2.5cm,在该段输尿管背侧将腰大肌钝性分离出一条深0.5cm沟状裂隙,将该段输尿管放置于裂隙底部后,用5-0 Prolene丝线间断缝合3-4针关闭裂隙,并同时切除大鼠左肾。造模分别在1周、2周、4周、8周解除梗阻,并测定1周、2周、4周、8周梗阻解除前后血清肌酐水平、肌酐清除率、肾间质I型、III型胶原蛋白半定量分析、二维超声检查、病理学检查,研究输尿管部分梗阻后肾形态学改变、肾功能变化及肾间质纤维化,了解输尿管部分梗阻解除后肾形态学改变、肾功能变化、肾间质纤维化及其恢复的程度。该实验虽然用大鼠造模,但需切除对侧肾,实验安全性不及保留双侧肾,实验指标选择内生肌酐清除率判别梗阻肾功能,但需测定24小时尿量方可计算出肌酐清除率,大鼠24小时尿量收集困难,由于动物实验室空调及温度的影响,24小时尿量难以准确测量,加上实验动物数量多,实验误差可能更大,在上腹部游离较长的输尿管损伤较大,且上腹部小肠肠袢较多,输尿管表面因游离导致粗糙面较大,术后易发生小肠肠袢粘连甚至肠梗阻,且粘连可以导致输尿管梗阻引起实验结果出现偏倚,二次手术时可因局部广泛粘连引起解除梗阻困难。腰大肌隧道包埋法造成的输尿管梗阻主要取决于腰大肌的张力,这必然受动物体位,活动量以及动物是否清醒等诸多因素的影响,甚至在此种条件下形成的肾积水可能是多次急性梗阻所致,违背了实验设计的初衷,实验的准确性,科学性难免受到影响。

 

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